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    PCR技術(shù)

    發(fā)布時(shí)間: 2025-05-12  點(diǎn)擊次數(shù): 144次

    PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))技術(shù)由美國生物化學(xué)家凱利·穆利斯于1983年發(fā)明,其核心原理是通過高溫變性、低溫退火和適溫延伸三個(gè)步驟的循環(huán),利用DNA聚合酶特異性擴(kuò)增目標(biāo)DNA片段。


    早期的PCR擴(kuò)增受限于耐高溫酶的缺失,效率非常低,因此在科研實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域接受度并不高。

    直至1986年,水生棲熱菌來源的Taq酶的應(yīng)用,才實(shí)現(xiàn)PCR穩(wěn)定、自動(dòng)化的高效擴(kuò)增。

    PCR實(shí)驗(yàn)技術(shù)一直以來不斷發(fā)展,例如基于普通PCR技術(shù)通過優(yōu)化反應(yīng)流程而衍生的巢式PCR、基于熱啟動(dòng)酶提高擴(kuò)增特異性的Hot start PCR、基于熒光檢測(cè)技術(shù)而發(fā)展qPCR、基于芯片微孔擴(kuò)增實(shí)現(xiàn)更高精度分析的數(shù)字PCR等。
    一般,正常的PCR反應(yīng)過程會(huì)經(jīng)歷3個(gè)核心階段:
    1 高溫95℃解開DNA模板(熱變性)
    2 降溫45-60℃使特異性引物與單鏈DNA互補(bǔ)結(jié)合(退火)
    3 再次升溫至72℃,耐熱Taq DNA聚合酶沿模板從引物3'端開始合成互補(bǔ)鏈(延伸)
    圖片



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