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    ZETA LIFE如何高效率轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞

    發(fā)布時(shí)間: 2025-04-28  點(diǎn)擊次數(shù): 396次

    ZETA LIFE如何高效率轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞

    1. 細(xì)胞接種:提前 1 天將細(xì)胞接種到培養(yǎng)板,如 6 孔板,使用含 10% 胎牛血清的高糖型 DMEM 培養(yǎng)基,且培養(yǎng)基中不加雙抗,使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到 60%-80% 左右。

    2. 質(zhì)粒準(zhǔn)備:使用無(wú)內(nèi)毒素提取試劑盒提取質(zhì)粒,將其溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水中,保證質(zhì)粒濃度在 500 - 700ng/ul 左右。

    3. 復(fù)合物制備:將質(zhì)粒 DNA 與 Zeta Life Advanced Transfection Reagent 按照 1:1 的比例直接混合,例如 12ug 質(zhì)粒對(duì)應(yīng) 12ul 轉(zhuǎn)染試劑,用移液器吹吸 10 - 15 次混勻,室溫靜止 10 - 15 分鐘。

    4. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞:將復(fù)合物加入含有(血清)細(xì)胞培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)板中,并輕輕混勻,放入 37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

    5. 細(xì)胞換液:轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液。

    6. 結(jié)果分析:對(duì)于質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染,在轉(zhuǎn)染 48 - 72 小時(shí)后,通過(guò)熒光檢測(cè)來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染效率;在 48 - 96 小時(shí)后,檢測(cè) mRNA 或蛋白的表達(dá)情況。如果要進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選,則在轉(zhuǎn)染后 24 - 48 小時(shí)左右,加入適量的藥物進(jìn)行篩選操作。


    另外,整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要注意使用無(wú)菌技術(shù),防止細(xì)胞污染;細(xì)胞的狀態(tài)對(duì)轉(zhuǎn)染效率影響較大,需確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期且健康;按照試劑說(shuō)明書要求儲(chǔ)存和使用轉(zhuǎn)染試劑,避免反復(fù)凍融等。


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