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    細(xì)胞凍存的方法和注意事項

    發(fā)布時間: 2021-12-08  點擊次數(shù): 3966次
    實驗室里有細(xì)胞未用到時,需要將細(xì)胞凍存,那細(xì)胞凍存應(yīng)怎么做呢?和細(xì)胞凍存時需要注意哪些問題,本期和大家分享細(xì)胞凍存的方法和需注意的事項。

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    1、冷凍培養(yǎng)基為什么要加DMSO?

    因為細(xì)胞在不加任何保護(hù)劑的情況下直接凍存時,細(xì)胞內(nèi)外的水分都會很快形成冰晶,冰晶的形成將造成細(xì)胞損傷,還可引起細(xì)胞的的死亡。目前多采用甘油和DMSO做保護(hù)劑。這兩種細(xì)胞無明顯毒性,分子量小,溶解度大,易穿透細(xì)胞,可以使冰點下降,提高包膜對水的通透性。


    2、DMSO 的等級和無菌過濾的方式為何?

    冷凍保存使用的 DMSO 等級,必須為 Tissue culture grade 的 DMSO,其本身即為無菌狀況,第一次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中,保存于 4 ℃,避免反復(fù)冷凍解凍造成 DMSO 的裂解而釋出有害物質(zhì),并可減少污染的機(jī)會。若要過濾 DMSO,則須使用耐 DMSO 的 Nylon 材質(zhì)濾膜。


    3、欲冷凍保存時,細(xì)胞冷凍管內(nèi)應(yīng)有多少細(xì)胞濃度?

    冷凍管內(nèi)細(xì)胞數(shù)目一般為 1x106 cells/ml vial,融合瘤細(xì)胞則以 5x106 cells/ml vial 為宜。


    4、冷凍保存細(xì)胞的方法?

    冷凍保存方法一:冷凍管置于 4 ℃ 30~60 分鐘 →-20 ℃ 30 分鐘 → -80 ℃ 16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽 vapor phase 長期儲存。

    冷凍保存方法二:冷凍管置于已設(shè)定程序的可程序降溫機(jī)中每分鐘降 1~3 ℃ 至 –80 ℃ 以下, 再放入液氮槽 vapor phase 長期儲存。–20 ℃ 不可超過 1 小時,以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入 –80 ℃ 冰箱中,存活率稍微降低一些。


    5、細(xì)胞凍存太多會不會浪費?

    每一種細(xì)胞系都應(yīng)有充足的凍存儲備,防止由于細(xì)胞污染等因素造成的細(xì)胞系的絕種,而且每一批次培養(yǎng)的細(xì)胞狀態(tài)都不同,應(yīng)該挑選幾個狀態(tài)較好的批次凍存保種。另外二倍體細(xì)胞等有限細(xì)胞系如果暫時不用最好凍存以免傳代太多,造成細(xì)胞衰老或者發(fā)生改變。



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