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    ELISA雙抗體夾心法

    發(fā)布時(shí)間: 2021-10-22  點(diǎn)擊次數(shù): 1184次
    簡(jiǎn)介
    ELISA 的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。


    材料與儀器
    (1) 包被緩沖液 (pH 9.6 0.05 M 碳酸鹽緩沖液)
    (2)洗滌緩沖液 (pH 7.4,0.15 M PBS)
    (3)稀釋液
    (4)終止液(2 M H2SO4)
    (5)底物緩沖液 (pH 5.0)
    (6)四甲基聯(lián)苯胺(TMB)使用液
    (7)2,2’-連氮基-雙-3-乙基-苯丙噻唑啉磺胺(ABTS)使用液
    (8)抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體:按說(shuō)明書處理。
    (9)標(biāo)準(zhǔn)品:用稀釋液稀釋成梯度濃度溶液。
    (10)96 孔聚苯乙烯塑料板 (酶標(biāo)板)。



    實(shí)驗(yàn)步驟

    用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。

    加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,通過(guò)反應(yīng)也結(jié)合在固相載體上。

    加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

    酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。

    某些分泌型蛋白,用siRNA 干擾后可以用ELISA 進(jìn)行檢測(cè)。



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